PCR基因扩增实验室设计

PCR实验室设计

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PCR基因扩增实验室名词解释:PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别,精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时判断病人最适合使用哪类抗病毒药物、判断药物疗效如何、给临床治疗提供了可靠的检验依据。

基因扩增实验又称PCR实验,其特点是能将微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物学研究和实验的常规方法,广泛应用于生物学各个领域,例如:艾滋病检测、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的检测和诊断,DNA指纹、个体识别、亲子鉴定及法医物证,动、植物检疫,动物及其衍生产品检测,动物饲料、化妆品、食品卫生检测,转基因作物与转基因微生物检测等。

一、PCR基因扩增实验室必须拥有的条件:
1、必须在无菌无尘环境下进行操作;
2、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书;
3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证;
4、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求;
5、必须拥有标准的的PCR荧光实验室;

二、PCR基因扩增实验室建立办法流程:
1、建立样品准备区;
2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道;
3、建立前PCR区;
4、PCR实验室试剂的操作;
5、在前PCR区建立PCR混合物;
6、控制污染的方法;
7、后PCR区PCR完成以后,需要分析样品并解释数据,应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方;

PCR实验室布局
PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有专用走廊,各工作区域应设缓冲间,工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区应是分隔独立的,各工作区有明显的标志,不能直通,如果紧密相连,需安装物品传递窗。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区,扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm,每20㎡一支40W的紫外灯。

PCR基因扩增实验室设计

验室各区功能及主要设备
1、试剂准备区:主要进行试剂的制备、分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区,不得经过其它区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的试剂。本区主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。
对于气流压力的控制,本区并没有严格的要求。
2、样品制备区:主要进行样品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区主要设备有冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴等。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
3、扩增区:主要进行DNA扩增。此外,已制备的DNA模板 (来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区主要设备有:扩增仪、冰箱、离心机、加样器等。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。
4、扩增产物分析区:扩增产物的测定。本区主要设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。
本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。

PCR实验室通风系统及压力控制
各区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。
PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式,严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。

PCR实验室装饰
实验室围护结构应牢固、气密性好;所有阴阳角宜采用圆弧过渡;墙体内壁光洁、不积尘、耐腐蚀、易清洗消毒;地面使用PVC卷材或环氧树脂自流坪,材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。五、PCR实验室注意事项
1、几个区域的大小设置情况,试剂准备区、扩增区、扩增产物分析区,空间可以相对小一些,样品制备区要放置生物安全柜和低温冰箱,空间应大一些。
2、试剂准备区、样品制备区设紧急洗眼器,以保证操作人员的安全。
3、PCR实验室没有严格的净化要求,可以根据用户的使用情况和资金的投入选择。

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